赖氨酸(lysine，Lys)含量测定试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。
测定原理：
蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-狈贬2，它与茚叁酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有—个游离氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制标准液。
组成：
产物名称 | BH6010-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：粉剂 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂二：液体 | 12.5ml | 4℃ |
试剂叁：液体 | 15ml | 4℃ |
试剂四：60%乙醇（自备） | 1 瓶 | 4℃ |
说明书 | 1 份 |
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅。
赖氨酸提取：
样本烘干粉碎，称取约 0.01g 样本，加入 1ml 提取液，充分匀浆。80℃水浴提取 20min，冷却后 10000g
离心 10min，取上清待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：取 10ml 试剂一与 10ml 试剂二混合摇匀，取上清备用。用不完的试剂 4℃保存。
3、在有盖EP 管中加入下列试剂：
试剂名称（μ濒） | 测定管 | 空白管 |
样本 | 100 |
|
提取液 |
| 100 |
工作液 | 200 | 200 |
混匀，80℃水浴 30min（盖紧，以防止水分散失），冷却至常温。
混匀，取 200μ濒 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 530nm 波长处记录吸光值A。△A=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。
赖氨酸含量计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0062x - 0.0212；x 为赖氨酸含量（µg/ml），y 为吸光值。
1. 按照蛋白浓度计算
赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷颁辫谤
2. 按照样本质量计算
赖氨酸含量(µg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×痴1÷痴2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷奥
V1：加入反应体系中样本体积，0.1ml；V2：加入提取液体积，1 ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量，g；1.1515，校正系数。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0031x - 0.0212；x 为赖氨酸含量（µg/ml），y 为吸光值。
1. 按照蛋白浓度计算
赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷颁辫谤
2. 按照样本质量计算
赖氨酸含量(µg/g 干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×痴1闭÷(奥 ×痴1÷痴2)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷奥
V1：加入反应体系中样本体积，0.1ml；V2：加入提取液体积，1 ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量，g；1.1515，校正系数。
您的位置：
更新时间：2025-01-10&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;
浏览次数：59
